nuclease
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작성일 24-07-22 02:03
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다.
6) 시약 회사에서 추천하는 완충용액의 종류가 다른 경우에는 활성이 약 한 완충용액을 사용하는 경우 효소의 양을 증가시켜 사용해도 무방하 다.순서
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8) 최적온도가 다른 두가지 효소를 처리하는 경우 반응액의 조성은 그대 로 두고 온도를 번갈아 처리해도 된다된다. 이런 현상은 Eco RI과 Bam HI을 혼합하여 자를 때 잘 발생 한다. 實驗방법은 위…(drop)
① Staggered, protruding 5phosphates
② Stagered, recessed 5phosphates, as with 3-OH protruding ends
③Blunt ends, 5phosphates, 3-OH
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3. 제한효소를 이용한 DNA의 부분적인 절단
이와 같은 實驗방법은 cloning하고자 하는 DNA 단편내에 동일한 제한효소 절단부위가 존재하는 경우 또는 제한효소 지도(restriction map) 제작시에 필요한 방법이다. 그러나 이 경우에도 따로따로 처리하는 것이 바람직하다.
7) 두가지 효소를 사용하는 경우에도 효소량이 반응 총액의 10%를 넘지 않도록 한다. 이때 B 완충용액을 사용하는 경우는 star activity가 생길 수 있으므로 주 의한다. 예를 들어 Eco RI과 Bam HI을 함께 사용하는 경우 H 완충용액 을 사용하면 Bam HI의 활성이 25∼50%밖에 나타나지 않으므로 Bam HI 효소의 양을 평상시보다 2∼4배 정도 사용하면 된다된다.
